上海安亭科學儀器廠酶標板轉子型號有,LXJ-IIB低速大容量多管離心機,這款是非常常賣的一款設備,容量大,最大可離心500mlx6,主要還能配備酶標板轉子,96孔的,文中介紹一種酶標板轉子低速離心細胞制片的方法。
摘要:常規培養懸浮細胞,離心收集細胞后,通過載玻片直接涂片、細胞涂片離心機和酶標板轉子低速離心機 3 種方法制備細胞涂片,經瑞氏 - 姬姆薩染色后,顯微鏡下觀察拍照。發現直接涂片中細胞圖像難以觀察,效果差,而細胞涂片離心機和酶標板轉子低速離心機制備的細胞涂片,細胞圖像清晰,均可達到細胞制片要求。 酶標板轉子低速離心細胞制片是一種便捷的新方法,下圖為上海安亭LXJ-IIB低速大容量多管離心機介紹:
關鍵詞:酶標板轉子、上海安亭離心機、細胞制片
將液體樣本均勻地涂布在載玻片上, 形成可以在顯微鏡下直接觀察細胞形態和結構變化的細胞涂片,是常用的生物醫學實驗手段。從機體組織或培養的細胞到肉眼觀察成像, 整個操作過程需要良好的技術和豐富的經驗。 如果細胞涂片需要長期保存或其他進一步操作如細胞染色等, 干燥固定是必不可少的處理措施, 雖然已有商品化的專用細胞涂片離心機, 但此技術在設備和方法上仍然存在著發展空間。 上海安亭LXJ-IIB低速大容量多管離心機可以直接制備細胞涂片,貼壁培養大腸癌細胞株細胞經離心機制片,保持了細胞貼壁生長的原來形狀 。
1、材料和方法
1.1、材料:白血病T淋巴細胞株為本實驗室保存,小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)、 RPMI1640培養液(杭州吉諾生物醫藥技術有限公司)、載玻片(江蘇飛舟玻塑有限公司帆船牌)、瑞氏 - 姬姆薩染色液;細胞涂片離心機(美國 cytospin ),LXJ-IIB酶標板轉子低速離心機(上海安亭科學儀器廠)。
1.2、方法
1.2.1、細胞培養細胞株培養于含10%小牛血清的RPMI1640( 加100 U/mL青霉素 、100U/mL鏈霉素)細胞培養基中,換液培養瓶中約一半液體傳代,加入相近量的細胞培養基,置于細胞培養箱中,待細胞培養室呈對數生長時備用。
1.2.2、細胞涂片制備與染色收集上述細胞 ,置于上海安亭離心機中800r/min離心5min,去上清液,加入PBS洗滌 1次,然后調整細胞濃度為1×106mL ,分別取等量的細胞進行3種方法制片。 直接涂片法,取20μL細胞懸液均勻涂布載玻片,然后置于室溫干燥;細胞涂片離心機法取等量的細胞,然后加200μL的PBS稀釋,安裝好載玻片加樣置于上海安亭離心機中500r/min離心3min ;酶標板轉子低速離心機法,先用透明膠帶固定載玻片上下端在酶標板上, 然后取20μL細胞懸液均勻涂布載玻片, 立即置于上海安亭科學儀器廠離心機中酶標板轉子上500 r/min離心3min 。 離心后取出載玻片置于室溫干燥,均加數滴甲醇固定,任其揮發干燥,然后瑞氏 - 姬姆薩染色,干燥后顯微鏡下觀察,CCD拍照。
2、結果
3 種方法制備的細胞涂片, 直接涂片法中制備的細胞涂片(A)細胞固縮,面積變小,染色深沉,細胞質核界限不清,難以看清細胞內部結構,整個圖像效果差,達不到細胞制片要求。而用上海安亭科學儀器廠生產的細胞涂片離心機和酶標板轉子低速離心機制備的細胞涂片(B\C)細胞均保持培養體系中原來大小,細胞核、質界限分明,細胞質藍色,細胞核深紫,也可見分裂相細胞,整個圖片清晰,經超過5張以上的細胞制片顯微鏡下觀察,圖像B\C均優于A,符合細胞制片要求,且 B 、 C 細胞染色效果沒有差異。第3種方法因直接涂片離心, 不需要過多的前期準備及后期配件清洗,操作過程更為便捷。
現有的細胞涂片技術, 較簡單的方法是直接涂布于載玻片上, 復雜方法需使用專用細胞涂片離心機,首先將載玻片置于該設備玻片匣里,墊一張自制帶孔載玻片大小的濾紙, 扣牢放入上海安亭離心機轉盤中,將處理好的細胞加入進樣孔,以一定速度離心,取出載玻片,最后清洗設備玻片匣備用。 直接涂布制片后染色,如圖 1A 細胞變形、縮小,效果差。 細胞涂片離心機制片效果好 ,細胞保持原狀,染色效果理想,符合生物醫學制片要求,與培養體系中理想細胞形態和結構保持一致。 并且此法僅僅是將載玻片用透明膠帶固定在酶標板上, 在原有的酶標板轉子低速離心機中離心而已,離心機是生物學教學、科研領域中常見的儀器 ,并沒有增加設備和耗材。 而且整個過程不需要太多的前期準備工作和后期的清洗負擔,也可用于其他來源的組織體液樣本,尤其適合高校教學,培養大學生實踐創新能力。此方法要求操作迅速, 不同樣本的離心速度和時間也不盡相同。 總之,以保留細胞、快速干燥細胞外而不損失細胞內水分為準則。
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