在RNA的提取實(shí)驗(yàn)中多由手工操作。 離心機(jī)是本次實(shí)驗(yàn)必須要用的設(shè)備,還有賽多利斯移液器。文中,上海安亭科學(xué)儀器廠就實(shí)際操作中的注意事項(xiàng)和大家分享,先分析在實(shí)驗(yàn)過程中需要注意的事項(xiàng)。
上海安亭科學(xué)儀器廠在文中介紹實(shí)驗(yàn)過程需要注意事項(xiàng),文中所用的離心機(jī)是上海安亭TDL-20bR高速冷凍離心機(jī):
(1)采取水泡皮、水泡液、血液 (抗凝血)、血清、組織、細(xì)胞培養(yǎng)物和口腔分泌物等樣品時(shí),取樣的器材必須經(jīng)高壓或者干熱滅菌。分離后的樣品在2~8℃條件下保存不能超過24h,-70℃可長期保存,但不能反復(fù)凍融3次。
(2)除裂解液4℃保存外,氯仿、異丙醇、75%乙醇在-20℃預(yù)冷。試驗(yàn)需在生物安全柜中進(jìn)行,每份樣本(1.5ml滅菌離心管)中加入600μl裂解液、200μl待測樣本,再加入200μl氯仿,用手顛倒混勻。置于冷凍離心機(jī)中于4℃中12000轉(zhuǎn)離心15min。在樣品數(shù)量較多時(shí),為了避免加樣順序錯(cuò)誤,可以使移液頭和樣品的位置一對(duì)應(yīng),還可以使離心管的管蓋略偏向一邊,加完一份樣品之后把管蓋撥向另一邊。
(3)上清液相轉(zhuǎn)移到對(duì)應(yīng)的離心管時(shí),可把離心管略微傾斜,在移液頭接觸到上清液面后,緩抬持移液器手的拇指,同時(shí)將移液器向下深入,當(dāng)移液頭快接觸到中間層時(shí)停止,眼睛盯住移液頭的尖部,如果發(fā)現(xiàn)有白色絮狀物進(jìn)入,拇指輕壓將其推出,然后停止吸液,這樣可以保證吸取液體中不含DNA和蛋白質(zhì),所有樣品轉(zhuǎn)移完成后切記顛倒混勻。
(4)每一步離心時(shí)要注意固定離心管的方向,通常將離心管開口朝向上海安亭離心機(jī)轉(zhuǎn)軸方向放置,這樣產(chǎn)生的核酸會(huì)位于離心管底部靠后的一側(cè),方便后面吸干殘液。
(5)在倒去上清倒置于吸水紙時(shí),吸水紙要有一定的厚度,防止液體滲透到試驗(yàn)臺(tái)上,污染其他樣品,也不要在一張紙上放置過多樣品,防止不小心碰倒離心管時(shí),樣品互相污染。用微量加樣器吸干殘液時(shí)不要碰倒離心管后部有沉淀的一面,每份樣品更換吸頭。在室溫下干燥時(shí)間不宜過長,否則會(huì)導(dǎo)致RNA不溶于DEPC水。
(6)實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的吸頭應(yīng)直接打入盛有10%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi),并與其他廢棄物品一同交由處理醫(yī)療廢棄物的專業(yè)人員處理 。工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用品經(jīng)常用10%次氯酸鈉 、75%酒精和紫外燈進(jìn)行消毒。
以上就是總結(jié)的一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn),以上內(nèi)容僅供大家參考。