文中,上海安亭科學儀器廠介紹了本廠生產的TGL-20bR高速冷凍離心機在腫瘤細胞檢測實驗中的應用,先介紹腫瘤細胞檢測實驗所需要用到的儀器試劑,在簡單介紹方法。上海安亭TGL-20bR高速冷凍離心機是最高轉速能到2萬轉每分鐘的離心機,可運用在各行各業。
1、先介紹實驗試劑與儀器
實驗試劑: 水溶性量子點購于北京北達聚邦科技有限公司;熒光染料,購于南京拜恩特斯生物科技有限公司。實驗所用溶劑不作特殊說明均用蒸餾水。培養基購自( 美國,紐約) 公司,胎牛血清購于四季青公司,胰蛋白購于 HyClone( USA) 公司;青鏈霉素購自 Solarbio( 中國,北京) 公司,MTT試劑購自Solarbio( 中國,北京) 公司,二甲基亞砜( DMSO) 購自 Solar-bio( 中國,北京) 公司。
實驗儀器: 高精度電子天平,磁力攪拌器加熱臺,超聲清洗器,恒溫水浴箱,移液槍,透射電子顯微鏡,光致熒光光譜儀( 蔚海光學儀器上海有限公司) ,紫外 —可見光吸收光譜儀( 上海精密儀器儀表有限公司) ,傅里葉光譜儀( 德國布魯克光譜儀器公司) ,熒光倒置顯微鏡( DMi8,Leica,德國) ,多功能酶標儀 SYNERGY -H4( 美國 Biotek) ,細胞恒溫培養箱水套CO2培養箱( 上海一恒科學儀器有限公司產品) ,TGL-20bR臺式冷凍離心機( 上海安亭科學儀器廠生產) 。
2、實驗方法
腫瘤細胞檢測體系的構建: 將 CdSe/ZnS 量子點溶液和Cy3熒光染料按照摩爾比例為 1:0,1:0.28,1:0.4,1:0.52,1∶0.76,1∶ 0.88,1∶ 1.2 和 1∶ 1.4 混合加入反應樣品瓶中,在常溫、常壓條件下攪拌5min,對混合溶液進行熒光測定。熒光光譜測定:在室溫條件下,依次取0.1ml量子點溶液與染料構建體系溶液,反之依次取0.1 mL 染料溶液與量子點溶液構建 體系溶液,以365nm為激發波長,掃描精度為0.79nm的Ocean Optics QED65000型熒光光譜儀進行測試,記錄200~1100nm波長范圍內的發射光譜變化。傅里葉紅外光譜測定: 常溫下將CdSe/ZnS 量子點溶液,y3 熒光染料和 體系溶液滴在云母片上,80℃下真空烘干24h備用。分別將 3 種待測樣品置于傅里葉紅外顯微鏡光譜儀下進行測量,獲得 3 種樣品數據。前列腺癌細胞熒光成像: 將實驗中需要使用的前列腺癌細胞分種在 6 孔培養板中。實驗前需要將前列腺癌細胞培養24h,細胞傳代密度達到60%~70%即可。量取配制好的 體系溶液10μL對前列腺癌細胞進行染色( pH =7. 3) ,搖勻后在37 ℃,5%CO2環境中培5min,移去培養液,用 PBS清洗3遍,在熒光倒置顯微鏡下觀察其細胞形態并進行熒光成像研究。
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