1、上海安亭科學儀器廠介紹靜脈血分析需要的材料與方法
實驗動物及細胞:小鼠購自武漢大學動物實驗中心,隔離盒飼養于動物中心SPF級屏障環境 (感染前)及動物生物安全三級實驗室(感染后)中,飼料、水、墊料均經高壓滅菌。 小鼠6-8周齡,實驗前適應性喂養;實驗注射外周血單個核細胞來源于武漢市中心血站中正常人外周血經分離得到的PBMCs。
實驗試劑與儀器:人淋巴細胞分離液購自北京索萊寶 科技有限公司;RPMI1640細胞培養液購于Hyclone公司;HIV-1病毒核酸檢測熒光PCR法試劑盒購自上海科華生物工程股份有限公司,儀器使用美國ABI7000熒光定量PCR儀;落地式自動平衡離心機由Eppendorf公司生產;上海安亭科學儀器廠高速離心機GL-20B。
上圖為上海安亭科學儀器廠生產的
GL-20B高速離心機的產品介紹,最大容量為500mlx6,最高轉速為20000轉每分鐘,自帶制冷壓縮機,溫度為-20~30℃,價格優惠,歡迎咨詢采購。
2、利用上海安亭GL-20B高速冷凍離心機分析靜脈血的實驗方法
離心機對人外周血單核細胞(PBMCs)的分離:血液采自武漢市中心血站隨機獻血健康人的靜脈血,肝素鈉抗凝,置于上海安亭GL-20B高速冷凍離心機中設置2500rpm離心15分鐘后取出血漿凍存,隨后用淋巴細胞分離液密度梯度離心分離出PBMC洗滌兩遍后,再用預熱RP-MI1640細胞培養液將細胞數調整至2×106個/mL。
移植細胞的準備以及注射:使用RPMI1640培養基懸浮人PBMC細胞至合適的細胞濃度,隨后在SPF級屏障環境中,用注射器吸取PBMC細胞懸液分別以腹腔注射和尾靜脈注射的方式對NOD/SCID小鼠免疫進行重構。
小鼠的人源化小鼠模型的建立:該部分實驗于動物生物 安全三級實驗室中完成。 小鼠移植PBMC細胞雌性小鼠共9只分三組,照射后24h內腹腔注射0.5mLPBMC細胞懸液(內含大約5×104細胞);實驗II組:3只雌性NOD/SCID小鼠,給予亞致死劑量全身照射。此外將注射0.2mLPBMC細胞懸液的雌性小鼠3只,作為實驗對照。
小鼠契合模型的鑒定:小鼠內人源性淋巴細胞檢測經移植PBMC細胞的小鼠,分別在2wk、3wk、4wk和10wk時間段內采集鼠眼眶靜脈血200uL/只,EDTA抗凝。流式細胞技術,檢測存活人淋巴細胞CD45+,CD4+,CD8+比例。嚴格按說明書要求操作,上機檢測。
感染HIV-1HIV-1 IIIB病毒株是X4株的野生型病毒,具有感染外周血單個核細胞的特性。取4只雌性NOD/SCID小鼠,給予亞致死劑量全身照射。 照射后24h內腹腔注射0.5mLPBMC細胞懸液(內含大約5×104細胞),活化三天后,使用預先用 HIVX4病毒株(RT活力單位為20萬)感染二天后PBMCs,以腹腔接種方式107/小鼠的劑量對小鼠進行攻毒處理。 第5wk時,小鼠經流式檢測結果表明人源性細胞存活并分化出CD45+,CD8+, CD4+細胞的比例。
綜上所述,血液的分析離心機是必不可少的設備。